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Bevacizumab是重組人源化人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）單克隆抗體，作為美國(guó)第一個(gè)獲得批準(zhǔn)上市的抑制腫瘤血管生成的藥，可用于轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌以及非鱗狀非小細(xì)胞肺癌治療等。在中國(guó)，超過(guò)10家貝伐珠單抗生物類似藥在研發(fā)上市過(guò)程中，面對(duì)生物類似藥分析，充滿技術(shù)挑戰(zhàn)，貝伐單抗生物類似藥表征是質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)之一，分析過(guò)程中，抗體肽圖分析方法尤為關(guān)鍵，今天我們就聊一聊貝伐單抗生物類似藥肽圖分析技術(shù)方法。

　　肽圖分析（peptide mapping）是研究抗體藥物結(jié)構(gòu)組成的重要技術(shù)之一，抗體通過(guò)酶切處理后，利用色譜結(jié)合島津高分辨Q-TOF質(zhì)譜LCMS-9030分析，不僅可以對(duì)蛋白質(zhì)氨基酸序列進(jìn)行分析，同時(shí)可以對(duì)于相應(yīng)肽段的翻譯化修飾（PTM）進(jìn)行分析。通過(guò)島津反相HPLC方法分離不同性質(zhì)的肽段，后續(xù)肽段通過(guò)高分辨質(zhì)譜進(jìn)行一級(jí)和二級(jí)掃描，通過(guò)監(jiān)測(cè)的母離子和子離子匹配相應(yīng)的肽段氨基酸序列以及存在的修飾。肽圖分析是抗體蛋白藥物質(zhì)量控制的重要手段，島津高分辨質(zhì)譜可以完成相關(guān)所有的分析檢測(cè)項(xiàng)目。

分析儀器及色譜柱方案

01 分析儀器

LCMS-9030

　　LCMS-9030四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀使高速度、高靈敏度的四極桿質(zhì)譜與TOF技術(shù)的緊密結(jié)合。融合島津先進(jìn)工程技藝的DNA，打造出速度與出色性能兼?zhèn)涞娜乱淮叻直尜|(zhì)譜儀，以優(yōu)異表現(xiàn)輕松勝任定性和定量分析挑戰(zhàn)。

02 液相色譜柱

Shim-pack GISS-HP,3um，150*3.0 mm

● 反相肽段分析專用色譜柱
● 壽命長(zhǎng)，耐壓高，出峰穩(wěn)定

應(yīng)用實(shí)例

　　以bevacizumab 生物類似藥為例，進(jìn)行peptide mapping分析，將抗體蛋白通過(guò)胰酶酶切后，通過(guò)反相色譜質(zhì)譜分離后進(jìn)入高分辨Q-TOF質(zhì)譜進(jìn)行一級(jí)全掃描和二級(jí)掃描，高分辨數(shù)據(jù)提取分析匹配相應(yīng)的肽段序列，完整流程如下圖所示。

圖.利用島津LCMS-9030抗體測(cè)序基本流程以及舉例

　　島津分析bevacizumab 生物類似藥序列分析，通過(guò)Shim-pack GISS-HP色譜柱（3um，150*3.0 mm），可以有效分離酶切后的輕重鏈肽段，至后用LC-MS 9030 進(jìn)行一級(jí)和二級(jí)掃描，優(yōu)化的參數(shù)色譜質(zhì)譜參數(shù)如下表所示。

圖.利用島津LCMS-9030抗體測(cè)序詳細(xì)參數(shù)

　　通過(guò)軟件分析高分辨數(shù)據(jù)，進(jìn)而匹配生物類似藥的重鏈和輕鏈序列，完成整個(gè)抗體的肽圖分析。因篇幅有限，以重鏈肽段序列部分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行展示，匹配覆蓋率100%，可以說(shuō)明島津LCMS-9030 Q-TOF質(zhì)譜在抗體肽段分析方面具有強(qiáng)大的實(shí)力。部分序列分析結(jié)果見(jiàn)下圖所示。

圖.bevacizumab 生物類似藥重鏈測(cè)序結(jié)果展示（部分展示）

　　結(jié)合前述案例，島津建立高分辨質(zhì)譜LCMS-9030針對(duì)抗體藥物進(jìn)行肽圖分析完整策略，此外對(duì)于分子量分析、翻譯化修飾、二硫鍵分析、糖基化分析，LCMS-9030可以完成所有相關(guān)抗體藥物關(guān)鍵質(zhì)量屬性檢測(cè)，為用戶節(jié)能增效，創(chuàng)造更大價(jià)值。

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