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其使用方法是在普通光學顯微鏡上換上相差聚光器和相差物鏡，將用水封載的玻片標本放在載物臺上，轉動相聚光器，使與物鏡的開口率或放大倍數(shù)相一致，鏡檢見物像。取下目鏡，換上合軸調(diào)整望遠鏡，伸縮望遠鏡筒，使看清物鏡相板上暗環(huán)和環(huán)狀光闌上的亮環(huán)；移動彩虹光圈，使暗環(huán)和亮環(huán)圓心重合；升降聚光器，使兩環(huán)完全重合，即在亮環(huán)內(nèi)外側看到暗的邊緣。取下望遠鏡，換上補償目鏡進行鏡檢。鏡檢時只能以微動螺旋調(diào)焦而不能轉動聚光器，否則需重新進行合軸調(diào)整。更換物鏡時也要重新進行合軸調(diào)整，然后才能觀察。相差顯微術需用水作封載劑并加蓋玻片。載玻片和蓋玻片厚度分別為1.0-1.2、0.17-0.18毫米，清潔無損。
(一)儀器和其他物品
(二)光源
顯微鏡不能采用直射陽光。晴天可用近窗的散射光作光源。也可用日光燈作為光源。而專為顯微鏡照明而制造的聚絲電燈是較好的光源。
在接通電源后，取下目鏡，直接向鏡筒內(nèi)觀察，并調(diào)節(jié)聚光鏡上的孔徑光闌，使其孔徑與視野恰好一樣大或略小于視野，其目的是使入射光展開的角度與物鏡的數(shù)值口徑(開口率NA)相一致，既可充分發(fā)揮該物鏡的分辨力，又能把超過該物鏡可能接受的多余光擋住，否則能產(chǎn)生干擾．影響清晰度。所以，原則上使用不同的物鏡時應相應調(diào)節(jié)孔徑光闌。放回目鏡后，通過調(diào)節(jié)聚光器上的視光闌或調(diào)節(jié)照明度控制鈕，選擇至 佳的照明效果。
1．標本放置
2．調(diào)焦
轉動粗調(diào)節(jié)螺旋，升高鏡臺(或下降鏡筒)、使低倍物鏡的前端接近載片，用左眼在目鏡上觀察，并轉動粗調(diào)節(jié)螺旋，使鏡臺下降(或鏡筒上升)，可看到物像，然后轉動細調(diào)節(jié)螺旋，使物假清晰。
3．換高倍鏡
用低倍鏡看到物像后，轉動標本移動器上的螺旋，選擇合適的視野，并把要觀察的部位置于視野的中 央，轉動物鏡轉換器把高倍鏡置鏡筒下方。顯微鏡在設計制造時，都是共焦點的，即低倍鏡對焦后，轉換高倍鏡時一般都能對準焦點，能看到物像，只需轉動細準焦螺旋便可使物像清晰。通過調(diào)節(jié)集光鏡上的視光闌或照明度控制鈕使獲得至 佳照明。
由于細 菌個體微小，需要用油鏡進行觀察。
1．滴加鏡油
轉動粗調(diào)節(jié)螺旋，使鏡臺下降(或使鏡筒上升) 在染色標本處滴加1－2 滴液體石蠟或香柏油。
2．轉換油鏡
轉動物鏡轉換器，把油鏡置鏡筒下方。
3．調(diào)焦
轉動粗調(diào)節(jié)螺旋，使鏡臺上升(或鏡筒下降)，讓鏡頭的前端浸入鏡油中。操作時要從側面仔細觀察，只能讓鏡頭浸入鏡油中緊貼著標本而避免讓鏡頭撞擊載玻片，導致玻片和鏡頭損。然后在目鏡下進行觀察，并緩慢;轉動細準焦螺旋使鏡臺下降(或使鏡筒上升)即可看到清晰的物像。
轉動細準焦螺旋使鏡臺下降(或使鏡筒上升)時，若油鏡已離開油滴，必 須重新進行上述調(diào)節(jié)操作。不得邊用左眼在目鏡上觀察，邊轉動細準焦螺旋使鏡臺上升(或鏡筒下降)使鏡頭前端浸入油滴中，這樣易使鏡頭撞擊載玻片，標本和鏡頭。
4．調(diào)節(jié)孔徑光闌和視光闌
把孔徑光闌開到至 大，使與油鏡的數(shù)值口徑相配，通過調(diào)節(jié)視光闌和照明度控制鈕選擇合適的照明。轉動粗調(diào)節(jié)螺旋，使鏡臺下降(或使鏡筒上升)，取出染色標本玻片，然后先用擦鏡紙接去油鏡上的香柏油，再用擦鏡紙沾少量二甲苯(不能用酒精)擦去沾在油鏡上的鏡油，至 后用擦鏡紙擦凈二甲苯及鏡油。用液體石蠟作鏡油時，可以只用擦鏡紙即可擦凈，不必用(或僅用少量)二甲苯。把鏡頭轉成“八”字形，套上鏡罩后放入顯微鏡柜中。

顯微鏡是貴重精 密的光學儀器，正確的使用、維護與保養(yǎng)，不但觀察物體清晰還可延長顯微鏡的使用壽命。

1、防潮：顯微鏡應放置在通風干燥，灰塵少，不受陽光直接曝曬的