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　Bevacizumab是重組人源化人血管內皮生長因子（VEGF）單克隆抗體，作為美國第一個獲得批準上市的抑制腫瘤血管生成的藥，可用于轉移性結直腸癌以及非鱗狀非小細胞肺癌治療等。在中國，超過10家貝伐珠單抗生物類似藥在研發(fā)上市過程中，面對生物類似藥分析，充滿技術挑戰(zhàn)，貝伐單抗生物類似藥表征是質量控制關鍵點之一，分析過程中，抗體肽圖分析方法尤為關鍵，今天我們就聊一聊貝伐單抗生物類似藥肽圖分析技術方法。

　　肽圖分析（peptide mapping）是研究抗體藥物結構組成的重要技術之一，抗體通過酶切處理后，利用色譜結合島津高分辨Q-TOF質譜LCMS-9030分析，不僅可以對蛋白質氨基酸序列進行分析，同時可以對于相應肽段的翻譯化修飾（PTM）進行分析。通過島津反相HPLC方法分離不同性質的肽段，后續(xù)肽段通過高分辨質譜進行一級和二級掃描，通過監(jiān)測的母離子和子離子匹配相應的肽段氨基酸序列以及存在的修飾。肽圖分析是抗體蛋白藥物質量控制的重要手段，島津高分辨質譜可以完成相關所有的分析檢測項目。

分析儀器及色譜柱方案

01 分析儀器

LCMS-9030

　　LCMS-9030四極桿飛行時間質譜儀使高速度、高靈敏度的四極桿質譜與TOF技術的緊密結合。融合島津工程技藝的DNA，打造出速度與性能兼?zhèn)涞娜乱淮叻直尜|譜儀，以優(yōu)異表現(xiàn)輕松勝任定性和定量分析挑戰(zhàn)。

02 液相色譜柱

Shim-pack GISS-HP,3um，150*3.0 mm

● 反相肽段分析專用色譜柱
● 壽命長，耐壓高，出峰穩(wěn)定

應用實例

　　以bevacizumab 生物類似藥為例，進行peptide mapping分析，將抗體蛋白通過胰酶酶切后，通過反相色譜質譜分離后進入高分辨Q-TOF質譜進行一級全掃描和二級掃描，高分辨數(shù)據(jù)提取分析匹配相應的肽段序列，完整流程如下圖所示。

圖.利用島津LCMS-9030抗體測序基本流程以及舉例

　　島津分析bevacizumab 生物類似藥序列分析，通過Shim-pack GISS-HP色譜柱（3um，150*3.0 mm），可以有效分離酶切后的輕重鏈肽段，用LC-MS 9030 進行一級和二級掃描，優(yōu)化的參數(shù)色譜質譜參數(shù)如下表所示。

圖.利用島津LCMS-9030抗體測序詳細參數(shù)

　　通過軟件分析高分辨數(shù)據(jù)，進而匹配生物類似藥的重鏈和輕鏈序列，完成整個抗體的肽圖分析。因篇幅有限，以重鏈肽段序列部分數(shù)據(jù)進行展示，匹配覆蓋率100%，可以說明島津LCMS-9030 Q-TOF質譜在抗體肽段分析方面具有強大的實力。部分序列分析結果見下圖所示。

圖.bevacizumab 生物類似藥重鏈測序結果展示（部分展示）

　　結合前述案例，島津建立高分辨質譜LCMS-9030針對抗體藥物進行肽圖分析完整策略，此外對于分子量分析、翻譯化修飾、二硫鍵分析、糖基化分析，LCMS-9030可以完成所有相關抗體藥物關鍵質量屬性檢測，為用戶節(jié)能增效，創(chuàng)造更大價值。

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